混合斑怎么提取精虫做DNA亲子鉴定

作者：安康亲子鉴定机构

2020-04-07 16:09:40

来源：http://www.akbchina.cn 作者：安康亲子鉴定机构

1、接到案件检材后，首先肉眼观察可疑斑痕，剪取少量斑痕置于载玻片上加一滴蒸馏水浸泡，并放于保湿盒内10分钟，充分使斑痕浸泡出来，干燥，甲醇固定，用酸性品红亚甲兰染色镜检，并确定有精虫。

用两步法提取精虫DNA.分别剪取适量检材斑痕，用3mlTES浸泡10分钟，加300μlSDS及30μl PK,充分混匀后放入37℃水浴中孵浴90分钟，在***步消化女性成分中，中间补加20μl PK,并每间隔15分钟混匀30秒。3500转离心10分钟，上清备用，沉渣再用蒸馏水洗涤3次，沉渣涂片镜检观察有精虫，用三种方法分别抽提DNA.

2.取100μl沉渣于1.5ml管中，加400μl TES,50μl SDS及12μl PK和30μl DTT,置于37℃水浴中过夜，依次用等体积的饱和酚、等体积的1:1酚/氯仿，等体积的氯仿抽提，水相中加入2.5倍体积的无水乙醇沉淀DNA,并置于-20℃冰箱中20分钟，离心去上清，用滤纸小心吸去残留在管壁的水分，加30μl去离子水充分混匀后置于100℃水浴中30分钟，即可进行PCR扩增检测。

3.取100μl沉渣置于1.5ml管中，加200μl Chelex-100,12μl PK及30μl的DTT,充分混匀后置于100℃水浴中30分钟，12000转离心后，取上清进行PCR扩增检测。

4.三种方法抽提的DNA与受害人、嫌疑人血样DNA一起同步扩增检测。PCR反应体系在20ul体系中进行。PCR缓冲液为50mmol/L KCL、10mmol/L Tris-Hcl、1.5mmol/L Mgcl、200mol/L dNTP,每组分别加0.5ulDNA,用本实验自己合成的CSF1PO等14对引物进行检测，置于扩增仪中95℃4分钟后88℃条件下加入1u的DNA聚合酶，95℃15秒，60℃15秒，72℃45秒，循环14次，在90℃15秒，60℃15秒，72℃45秒循环16次，95℃5分钟后备检。

5.聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳90分钟，AgNO3染色，碳酸钠显色。有机法提取DNA过程中，利用DNA只溶于水，而难溶于有机溶剂这一特性，用有机溶剂进行萃取，清除检材中脂类、色素、染料等，并使蛋白质（酶类）变性，使DNA得以浓缩纯化，但其有不能有效地祛除金属离子对扩增的影响及步骤繁琐，污染机会多，DNA损失等缺点；

5%的Chelex-100法，是利用Chelex-100具有较强的金属离子亲和力，能彻底地螯和金属离子，清除金属离子对扩增的抑制，并防止DNA的降解，而且方法简便快捷，并在100℃煮沸30分钟的条件下使精虫细胞膜得以破裂，精虫DNA得到有效释放，其缺点是检材中的高浓度金属离子、色素、染料、脂类、蛋白质等成分不能清除，DNA未得到浓缩。

以上就是混合斑怎么提取精虫做DNA亲子鉴定详情，如有更多疑问，欢迎在线详细咨询。

标签： ,混合斑怎么提取精虫做DNA亲子鉴定，亲子鉴定，混合斑亲子鉴定,

来源：http://www.akbchina.cn

上一篇：DNA亲子鉴定具体的费用是多少呢?咋做?

下一篇：有什么方法能够确认孩子生父另有其人

用户评论

黄先生 / ceo
3分钟前
一直担心孩子是不是在医院报错了，感觉孩子和我长得不像，在安康生物亲子鉴定中心做了DNA亲子鉴定，终于解开了心中的疑惑，非常感谢！
唐女士 / 微商
11分钟前
老公一直怀疑孩子是不是他亲生的，这件事儿我耿耿于怀很久了，终于鼓起勇气来安康生物亲子鉴定中心做了无创胎儿亲子鉴定，选择的匿名委托，客户的保密工作做的不错~
林先生 / 投资
18分钟前
终于拿到DNA亲子鉴定报告，顺利的解决了孩子的上学难题。非常感谢安康生物亲子鉴定中心的工作任务，服务非常周到，主要是报告也得到了政府部门的认可顺利解决问题~~
宝娜杰
26分钟前
一个人带女儿来安康生物亲子鉴定中心做的DNA亲子鉴定，他们这儿的工作人员保密工作做得非常好，总体感觉非常不错~
撒哈拉
45分钟前
在网上查询了很多家DNA亲子鉴定机构的价格，普遍都是好几千元，安康生物亲子鉴定中心这家机构的价格相对便宜些，而且安康生物亲子鉴定中心非常正规。确认了孩子是老公的之后我就可以安心养胎了。
蓝色优郁
59分钟前
安康生物亲子鉴定中心服务非常周到，办事效率也是很高的，为了给孩子办理相关证件，我咨询了是多家亲子鉴定机构，这家资质正规，靠谱！

加载更多评论

国内服务平台

正规资质
报告真实
准确快速
保密承诺

混合斑怎么提取精虫做DNA亲子鉴定

用户评论

黄先生 / ceo

唐女士 / 微商

林先生 / 投资

宝娜杰

撒哈拉

蓝色优郁

国内服务平台

最近更新

产品服务

鉴定百科

用户帮助

关于我们